珠子参ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要：

目的：建立珠子参的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。方法采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取珠子参总DNA ，并用正交设计实验对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。结果提取的基因组DNA纯度和完整性较好，A260/A280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，可满足ISSR-PCR扩增要求。珠子参ISSR分析的最适反应体系为：在20μL PCR反应体积中，含10 ng模板DNA、0．20 mmol · L -1 dNTPs、1．5μmol · L -1引物、3 U TaqDNA 聚合酶、2μL 10× PCR Buffer、3 mmol · L -1 M g2＋。扩增程序为：95℃预变性5 min ，94℃变性30 s ，58℃退火30 min ，72℃延伸1 min ，循环40次，72℃延伸10 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。结论建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究珠子参的遗传变异和遗传多样性。

关键词：珠子参、基因组DNA、ISSR反应体系、遗传多样性

分类号：R282(中药学)

资助基金：国家自然科学基金项目编号81102805／H2804；陕西省科技统筹创新工程项目编号2011KTCQ03-02；陕西省科学技术研究发展计划项目编号2011K16-02-02；陕西省教育厅项目2010JK502；陕西省中医管理局专项科研计划项目编号ZY08

在线出版日期：2014-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：551-554