重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究

摘要：

目的 对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-IHI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法 对包涵体蛋白纯化复性的工艺.方法 工程菌pET28a-IHI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干爆,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验.结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg.结论 该工艺耗时短,效果好,成本较低.

关键词：基因工程、重组人胰岛素、纯化、磺酸化

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No.30701023,No.30872393江苏省自然科学基金项目BK2007170

在线出版日期：2010-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：206-208