ROCK2在ARC中的表达及对晶状体上皮细胞的自噬及氧化损伤的影响

摘要：

目的 探讨Rho激酶2(ROCK2)在年龄相关性白内障(ARC)晶状体前囊膜中的表达及其对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞自噬及氧化损伤的影响.方法 收集2020年6月～2021年4月在我院行超声乳化白内障吸出术的ARC患者20例,获取晶状体前囊膜,并获取眼科标本库中无眼科疾病、眼球结构完整且晶状体透明的正常晶状体前囊膜.免疫组织化学染色和Western blot检测ROCK2蛋白表达;将人晶状体上皮细胞HLE-B3随机分为对照组、H2O2组、sh-NC+H2O2组和sh-ROCK2+H2O2组,转染sh-NC或sh-ROCK2至对应组细胞,并用H2O2处理细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞转染效率,MTT法检测各处理组细胞增殖活性,透射电镜观察细胞内自噬现象,自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后观察自噬溶酶体和自噬体水平,Western blot检测细胞中自噬相关蛋白表达情况,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量.结果 与正常组织比较,ARC中ROCK2表达增高(P<0.05);转染sh-ROCK2后成功下调了HLE-B3细胞中ROCK2表达水平(P<0.05);与对照组比较,H2O2处理细胞后,细胞增殖活性显著下降,自噬体明显增多,明显激活了自噬溶酶体和自噬体水平,Beclin-1蛋白相对表达量显著升高,LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著上调,ROS水平显著上升,SOD和GSH-Px的活性均显著降低,MDA含量则显著升高(均P<0.05);与H2O2组比较,细胞转染sh-ROCK2后再用H2O2处理,细胞增殖活性显著提高,自噬体减少,自噬溶酶体和自噬体水平受到抑制,Beclin-1蛋白相对表达量显著降低,LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著下调(均P<0.05),同时,细胞内ROS水平显著下降,SOD和GSH-Px的活性均显著升高,MDA含量显著降低(均P<0.05).结论 ROCK2在ARC晶状体前囊膜内高表达,下调其表达能够抑制H2O2诱导的人晶状体上皮细胞过度自噬,减少氧化损伤.

关键词：年龄相关性白内障、Rho激酶2、人晶状体上皮细胞、自噬、氧化损伤

所属期刊栏目：35

分类号：R774.1(眼科学)

资助基金：海南省卫生健康行业科研项目20A200302

在线出版日期：2023-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：188-194,202