人肺泡上皮细胞A549中细胞间粘附分子-1的siRNA构建探讨

摘要：

目的 构建A549细胞中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的小干扰RNA,探讨ICAM-1特异性siRNA能否抑制LPS诱导A549细胞ICAM-1的表达.方法 采用化学合成法构建A549细胞ICAM-1的小干扰RNA.LPS诱导A549细胞ICAM-1表达,用RT-PCR和流式细胞仪分别从mRNA和蛋白水平检测ICAM-1的表达.使用阳离子脂质体Lipofectamin2000转染ICAM-1siRNA到A549细胞,再用LPS刺激A549细胞,RT-PCR和流式细胞仪分别检测RNA干扰A549细胞后ICAM-1的mRNA和蛋白表达.结果 LPS可以诱导A549细胞ICAM-1的表达,但LPS浓度过大损伤细胞.10 ng/ml的LPS组和100 ng/ml的LPS组OD值相比,两组OD值之间差异有显著性(P＜0.001).10ng/ml的LPS作用A549细胞8h左右,细胞无明显损伤;10 ng/ml LPS作用A549细胞1h后,ICAM-1 mRNA的表达上调(P＜0.05),而ICAM-1蛋白水平增加不明显;10 ng/ml LPS作用A549细胞4h后,ICAM-1 mRNA表达水平明显增加(P ＜0.05),ICAM-1蛋白水平也增加明显.通过化学合成法构建ICAM1的siRNA,筛选出最优siRNA.转染ICAM-1siRNA后,LPS刺激A549细胞的ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平增加不明显.结论 通过化学合成法构建的ICAM-1siRNA,可以有效地干扰ICAM-1的表达,ICAM-1siRNA降低了LPS诱导的ICAM-1的表达.

关键词：细胞间黏附分子1、小干扰RNA、脂多糖、转染

所属期刊栏目：29

分类号：R56;R392.11(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：四川省卫生厅科研课题100051;成都市科技计划资助项目12PPYB042SF-002

在线出版日期：2017-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1498-1503