兔抗细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备兔抗重组细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体并进行鉴定.方法 合成并构建pET21a(+)-CDK6重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法检测蛋白表达;用镍氮川三乙酸(Ni-NTA)亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分析;纯化后的CDK6蛋白多部位、多次(隔周)免疫日本大耳白兔,分别于免疫的0、2、4、6周取血,分离血清.采用间接ELISA检测效价,Western blot法、免疫荧光细胞化学染色和免疫组织化学染色法检测其特异性.结果 表达并获得高纯度的CDK6蛋白,制备了兔抗CDK6重组蛋白抗体,其效价达1∶30 000,能特异性识别宫颈癌细胞及宫颈癌组织中表达的CDK6蛋白.结论 成功制备了高效价、特异性强的兔抗CDK6抗体.

关键词：细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、重组蛋白、基因表达、血清抗体

所属期刊栏目：39

分类号：R392.7;Q344+.13;R392-33

资助基金：浙江省科技厅公益项目LGF18H160030

在线出版日期：2023-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：742-747