T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR-T细胞功能鉴定中的应用

摘要：

目的 将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR-T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案.方法 采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒.慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率.通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR-T细胞的功能.结果 酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR-T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR-T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR-T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能.结论 TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR-T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段.

关键词：T细胞活力响应性启动子(TARP)、萤光素酶报告基因系统、嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T cells)

所属期刊栏目：39

分类号：R457.2;R730.51;R392.12(治疗学)

资助基金：国家自然科学基金;国家肿瘤生物学重点实验室自主课题

在线出版日期：2023-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：397-403