线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达及兔多克隆抗体制备

摘要：

目的 构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定.方法 构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BI21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.提取蛋白包涵体,并用8 mol/L尿素溶解,His-NTA柱纯化.获得纯化SLC25A28蛋白免疫新西兰大白兔制备SLC25A28多克隆抗体,Western blot法鉴定SLC25A28抗体特异性.结果 成功构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达载体质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达SLC25A28蛋白,蛋白纯度约为90％,Western blot法证明制备的抗体能特异性识别小鼠睾丸组织中的SLC25A28蛋白.结论 成功对人SLC25A28进行了原核表达,并制备了具有特异性的兔抗人SLC25A28多克隆抗体.

关键词：线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin2/SLC25A28)、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体、免疫特异性

所属期刊栏目：39

分类号：Q512;S852.4+3(蛋白质)

资助基金：国家自然科学基金;陕西省自然科学基础研究计划项目;肿瘤生物学国家重点实验室自主课题

在线出版日期：2023-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：268-274