miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤
目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响.方法 采用人SH-SY5Y细胞,设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组).噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达,Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bc12)、Bc12相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK/p38 MAPK)蛋白水平.采用 miR-155-5p 模拟物(miR-155-5p mimic)、miR-155-5p 抑制物(miR-155-5p inhibitor)调节 SH-SY5Y 细胞 miR-155-5p 表达,生物信息学预测miR-155-5p与细胞因子信号传送阻抑物1(SOCS1)靶向关系并进行荧光素酶实验验证.构建miR-155-5p与SOCS1均下调的SH-SY5Y 细胞(miR-155-5pinhibitor/si-SOCS1组),采用上述方法检测细胞活性、细胞凋亡、炎性细胞因子mRNA表达以及SOCS1蛋白表达和p-NF-κB p65/NF-KB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值.结果 与对照组相比,LPS组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 水平升高,miR-155-5p 表达量和 p-NF-κB p65/NF-κB p65 和 p-p38 MAPK/p38 MAPK 比值升高.与 LPS 组相比,miR-155-5p inhibitor组SH-SY5Y细胞活性、Bc12蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达升高,miR-155-5p表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3 和 BAX 蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 水平、p-NF-KB p65/NF-KB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低.与LPS组相比,miR-155-5p mimic组SH-SY5Y细胞活性、Bc12蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,miR-155-5p 表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3 和 BAX 蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 水平、p-NF-KB p65/NF-KB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK 比值增加.miR-155-5p 与 SOCS1 具有靶向关系,与 miR-155-5p inhibitor 组相比,miR-155-5p inhibitor/si-SOCS1 组细胞活性、IL-10 mRNA 水平降低,细胞凋亡率、p-NF-κB p65/NF-KB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK 比值、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高.结论 抑制miR-155-5p表达可减轻LPS诱导的神经炎症损伤,可能与靶向下调SOCS1表达有关.
神经炎症损伤炎症、SH-SY5Y细胞、miR-155-5p、细胞因子信号传送阻抑物1(SOCS1)、细胞活力、细胞凋亡、炎症因子
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R392.12;R364.5;Q279;S853.54
河南省科技攻关计划基金资助项目2015072521
2023-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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