人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定

摘要：

目的 克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798～1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定.方法 PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671～3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆菌表达菌株BI21(DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达;利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)金属鳌合亲和层析树脂进行蛋白纯化,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;通过间接ELISA和Western blot法进行效价和特异性鉴定.结果 成功构建pCZN1-FAK重组表达载体,FAK蛋白主要以包涵体形式表达.目的蛋白纯化后,制备的兔抗FAK多克隆抗体效价达1∶512 000,且与外源和内源FAK蛋白发生特异性反应.结论 成功克隆、表达与纯化FAK蛋白,制备兔抗FAK多克隆抗体,可用于内源FAK蛋白特异性检测.

关键词：人黏着斑激酶(FAK)、多克隆抗体

所属期刊栏目：39

分类号：S852.4+3;Q511;R392.11(动物医学（兽医学）)

资助基金：安徽省自然科学基金;安徽省自然科学基金;安徽省高校自然科学研究重点项目;蚌埠医学院512人才培育计划项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;安徽省大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2023-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：175-180