稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In™ CHO细胞系的建立

摘要：

目的 建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In? CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础.方法 构建POR重组慢病毒并感染Flp-In? CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株.利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In? CHO-POR细胞株.构建稳定双表达POR 和 CYP2C19 的 Flp-In? CHO-POR 细胞(Flp-1n?CHO-POR-2C19)和单表达 CYP2C19 的 Flp-In? CHO 细胞(Flp-In? CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性.结果 与感染阴性对照病毒的Flp-In? CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In? CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In?CHO-POR细胞.与Flp-In? CHO细胞相比,Flp-In? CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In? CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In? CHO-2C19细胞.结论 成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In? CHO-POR细胞系.

关键词：人细胞色素P450氧化还原酶(POR)、慢病毒、Flp-In™ CHO-POR细胞系

所属期刊栏目：39

分类号：Q554;Q559+.9;R392-33(酶)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省省级科技计划项目;贡州省晋通高等学校科技拔尖人才项目;贵州省优秀青年科技人才项目

在线出版日期：2023-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：103-108