兔抗小鼠Tubby样蛋白2(TULP2)多克隆抗体的制备与应用
目的 制备兔抗小鼠Tubby(Tub)样蛋白2(TULP2)多克隆抗体并检测TULP2蛋白在小鼠睾丸中的表达情况.方法 分别将TULP2蛋白编码序列全长和TULP2蛋白含Tub结构域的羧基端(TULP2-C)插入pET-30a(+)质粒中,构建pET-30a(+)-TULP2和pET-30a(+)-TULP2-C原核表达重组质粒.将两种质粒分别转化人大肠杆菌E.coli BL21中,用异丙基-β--D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核蛋白表达.利用组氨酸(His)融合蛋白纯化柱纯化TULP2和TULP2-C原核蛋白,用梯度浓度的尿素复性.分别以复性后的TULP2和TULP2-C原核蛋白为抗原免疫成年雄性新西兰大白兔,获得两种类型的TULP2多克隆抗体.应用ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法及免疫荧光技术确定自制多克隆抗体的有效性及特异性.结果 成功构建了 pET-30a(+)-TULP2以及pET-30a(+)-TULP2-C重组质粒,并且通过IPTG诱导,表达出TULP2和TULP2-C原核重组蛋白.ELISA检测两种抗体滴度均达到1∶1 000 000.Western blot法、免疫荧光染色结果显示,利用TULP2-C原核蛋白为免疫原制备的抗体特异性较差.而利用TULP2全长蛋白为免疫原制备的多克隆抗体可以特异识别成年野生型小鼠睾丸中内源性的TULP2蛋白,而且可用于免疫荧光组织化学染色,结果显示TULP2在成年野生型小鼠的圆形精子细胞及其后变形期的精子细胞中表达.结论 应用TULP2全长蛋白为抗原可成功制备兔抗小鼠TULP2多克隆抗体,可同时用于Western blot法及免疫荧光组织化学染色.
Tubby样蛋白2(TULP2)、多克隆抗体、精子发生
38
R392-33;Q954.43+4;Q786;R321.1
国家自然科学基金;江苏省高校自然科学研究重大项目;扬州大学研究生科研创新计划项目;国家级大学生创新创业训练计划项目
2022-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
452-459
