大鼠抗新冠病毒主蛋白酶多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的 原核表达与分离纯化新冠病毒主蛋白酶(Mpro)并制备大鼠抗Mpro多克隆抗体用于研究Mpro在2019冠状病毒病(COVID-19)中的免疫学功能.方法 将密码子优化的新冠病毒Mpro基因连接到pET-28a载体中,构建重组质粒pET-28a-Mpro.再将其转化到E.coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,经原核表达条件优化后,以亲和层析法分离纯化Mpro.将纯化的Mpro作为抗原免疫大鼠,制备抗Mpro多克隆抗体.以ELISA和Western blot实验鉴定抗Mpro多克隆抗体的效价、抗原特异性与灵敏性.结果 利用大肠杆菌原核表达技术,确定了Mpro的最佳表达条件并成功进行了分离纯化.ELISA与Westem blot实验结果证实,制备的抗Mpro多克隆抗体效价可达1∶256000,且具有良好的抗原特异性与灵敏性.结论 成功制备了高特异性大鼠抗Mpro多克隆抗体,为研究Mpro在COVID-19中的免疫学功能奠定了实验基础.

关键词：新冠病毒;主蛋白酶;原核表达;多克隆抗体;ELISA

所属期刊栏目：37

分类号：R392.11;R392-33;Q789

资助基金：国家自然科学基金;安徽省自然科学基金;安徽省高校自然科学研究重大项目;安徽省重点研究与开发计划项目;皖南医学院大学生科研资助金

在线出版日期：2022-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1032-1037