利用胸腺类器官体外诱导小鼠T淋巴细胞分化
目的 体外构建胸腺类器官,模拟胸腺组织三维结构,诱导多种来源小鼠造血干祖细胞(HSPC)向T细胞分化.方法 构建表达小鼠Delta样经典缺刻基因配体1(DLL1)及绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体;通过逆转录病毒感染OP9小鼠骨髓间充质细胞,构建OP9-DLL1细胞系;实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测OP9-DLL1细胞DLL1的mRNA和蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色检测OP9-DLL1细胞DLL1的表达和分布;提取C57BL/6小鼠E13.5胎肝HSPC及骨髓HSPC,分别与OP9-DLL1细胞按适当比例混合后离心压实,置于气-液交面培养;利用荧光显微镜观察胸腺类器官生长,流式细胞术检测T细胞表面CD3、CD4、CD8、CD25、CD44、CD45、CD117、T细胞受体β(TCRβ)表达,免疫荧光组织化学染色观察造血细胞在胸腺类器官的分布.结果 成功构建表达小鼠DLL1及GFP的逆转录病毒载体,逆转录病毒感染OP9细胞后,通过GFP筛选获得OP9-DLL1细胞,OP9-DLL1细胞DLL1 mRNA和DLL1蛋白表达明显增加,DLL1蛋白表达于OP9-DLL1细胞膜.诱导培养40 d内,胸腺类器官状态良好且体积逐渐增大.胸腺类器官诱导T细胞程序性分化,HSPC分化为CD3+T细胞.结论 通过OP9-DLL1细胞成功构建胸腺类器官,体外诱导多种来源小鼠HSPC向T细胞分化.
T细胞分化;体外;胸腺类器官;缺刻基因1(NOTCH1)
37
Q254;R392.12;R392-33(细胞生理学)
国家自然科学基金81870126,82070167
2021-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
679-686
