稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定
目的 构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能.方法 以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养,ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度.结果 插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1 × 108转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中,CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后,IL-2、IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加.结论 稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞.
CD19、HeLa细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞、慢病毒、实体肿瘤
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S718.85;R392.12(林业基础科学)
国家重点研发计划2018YFC1313400
2021-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1095-1101
