社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体毒素促进THP-1细胞自噬并激活NLRP3炎性体

摘要：

目的 研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制.方法 采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp 毒素,5μg/mL 和10 μg/mL rCARDS Mp 毒素作用THP-1 细胞20 min、40 min、1h、2h和3h.Western blot法检测THP-1 细胞自噬相关蛋白beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ(LC3 Ⅱ)和P62表达水平,实时定量PCR检测THP-1细胞NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-l)和白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA水平,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯染色检测THP-1细胞活性氧(ROS)水平.结果 与正常细胞对照组相比,rCARDS毒素作用1h内,THP-1细胞beclin-1、LC3和P62表达量随着作用时间延长明显增加;rCARDS毒素作用2h和3h时,beclin-1、LC3和P62表达量降低.rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min和40 min时,5 μg/mL、10 μg/mL rCARDS Mp毒素组细胞NLRP3表达量无显著差别,但在各时间点,rCARDS Mp毒素处理的THP-1细胞NLRP3 mRNA水平均显著高于正常对照组,且作用lh和2h时,10 μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平显著高于5 μg/mL组,而3h时5 μg/mL组和10 μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平均低于2h时.rCARDS Mp毒素作用40 min、1 h和2h时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞caspase-1 mRNA水平均高于正常细胞对照组,作用40 min、1 h、2 h和3h时,10 μg/mL组细胞caspase-1 mRNA水平均显著高于5 μg/mL组.与正常细胞对照组相比,rCARDS Mp毒素作用20 min和40 min时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞IL-1β mRNA水平变化不明显,rCARDS Mp毒素作用1 h～3 h时,各组细胞IL-1β mRNA和ROS水平显著增加并呈剂量依赖性.结论 CARDS肺炎支原体毒素可以激活THP-1细胞NLRP3炎性体活化并诱导细胞自噬.

关键词：肺炎支原体毒素、社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)、自噬、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)

所属期刊栏目：36

分类号：R563.1;R563.1+5;R392-33;R392.1(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：镇江市高等专科学校青年专项课题GZQNZX2019014

在线出版日期：2021-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1076-1082