吡咯野百合碱诱导的A549细胞激活TGF-β1/SMAD2/SMAD3通路促进人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移
目的 探讨A549细胞对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖迁移的影响及其机制.方法 A549细胞培养组分为对照组、二甲基甲酰胺(DMF)溶剂组、吡咯野百合碱(MCTP)组、MCTP联合转化生长因子β(TGF-β)受体阻断剂苯甲酰胺(SB431542)组.A549细胞和HPASMC共培养组分为HPASMC对照组、A549细胞与HPASMC共培养组、MCTP刺激A549细胞与HPASMC共培养组、MCTP联合SB431542刺激A549细胞与HPASMC共培养组,IL-6刺激HPASMC阳性对照组.CCK-8法检测A549细胞的增殖活性,ELISA检测A549细胞培养上清液白细胞介素6(IL-6)的水平,反转录PCR检测A549细胞SMAD家族成员2 (SMAD2)、SMAD3的mRNA水平,Western blot法检测各组A549细胞TGF-β1、SMAD2、SMAD3、磷酸化的SMAD2(p-SMAD2)、p-SMAD3蛋白水平,各共培养组HPASMC的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白水平.TranswellTM小室和划痕实验检测各共培养组HPASMC的迁移能力.结果 在A549细胞培养组中,与对照组相比,经MCTP刺激A549细胞的增殖能力减弱,IL-6分泌量增加,TGF-β1、SMAD2、SMAD3、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达增加;与单用MCTP组相比,MCTP联合阻断剂SB431542组A549细胞的增殖能力增加,IL-6分泌量减少,TGF-β1、SMAD2、SMAD3、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达减弱.在共培养体系中,与HPASMC组相比,A549细胞与HPASMC共培养组细胞的迁移变化不明显,PCNA、OPN蛋白表达无明显变化;与HPASMC组相比,经MCTP刺激后的A549细胞和HPASMC共培养组HPASMC细胞迁移能力增加,PCNA、OPN蛋白表达增加;与MCTP刺激后的A549细胞和HPASMC共培养组相比,MCTP联合阻断剂SB431542刺激A549细胞和HPASMC共培养组迁移能力减弱,PCNA、OPN蛋白表达减弱;与HPASMC组相比,IL-6阳性对照组HPASMC细胞迁移能力增加,PCNA、OPN蛋白表达增加.结论 MCTP诱导的A549细胞激活HPASMC的TGF-β1/SMAD2/SMAD3通路增加HPASMC的IL-6分泌,促进HPASMC的增殖和迁移.
A549细胞、人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)、细胞增殖、细胞迁移、白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)
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R392.12;Q279;R392-33;R364.5
国家自然科学基金81560081
2020-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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