NLS-RARα通过与importin α1/β1(KPNA2/KPNB1)结合入核并抑制U937细胞分化

摘要：

目的 探究核定位信号-维甲酸受体α(NLS-RARα)异常的核定位对细胞分化的抑制作用以及其核转运机制.方法 过表达带有血凝素(HA)标签的NLS-RARα慢病毒和空载体慢病毒转染HEK293T细胞和U937细胞,设为NLS-RARα过表达组(NR组)和阴性对照组(NC组).提取HEK293T细胞与U937细胞NC组和NR组细胞核和细胞质蛋白,Western blot法检测NLS-RARα的定位.同时采用免疫荧光细胞化学染色检测NLS-RARα的定位情况.1α,25-二.羟维生素D3(1,25 D3)诱导U937细胞分化,实时定量PCR,Western blot法检测细胞CD11b、CCAAT/增强子结合蛋白β(CEBPβ)在mRNA和蛋白水平,采用质谱和免疫共沉淀技术(CoIP)筛选与NLS-RARα相作用的转运蛋白,并且通过小干扰RNA(siRNA)转染验证其对NLS-RARα的核定位作用.结果 NLS-RARα主要位于细胞核中.与对照组相比,过表达NLS-RARα组CD11b和CEBPβ的增加减少,说明NLS-RARα对1,25D3诱导的细胞分化有抑制作用.质谱和CoIP结果发现核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importin α1)和核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importin β1)与NLS-RARα有相互作用,敲低KPNA2/KPNB1则抑制NLS-RARα入核.结论 NLS-RARα通过结合KPNA2/KPNB1入核,抑制U937细胞分化.

关键词：核定位信号、维甲酸受体α(RARα)、细胞分化、核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importin α1)、核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importin β1)

所属期刊栏目：36

分类号：Q279;Q254;R392-33(细胞生物物理学)

资助基金：国家自然科学基金;重庆市科学技术委员会

在线出版日期：2020-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：499-506