HPV16型E6重组蛋白的表达及其兔多克隆抗体的制备

摘要：

目的 制备人乳头瘤病毒(HPV) 16型E6原核表达蛋白及其多克隆抗体.方法 通过PCR法从Siha细胞株中获取HPV16 E6基因后克隆至pET21a(+)载体,构建pET21a(+)/HPV16 E6重组质粒,并经测序鉴定;将重组质粒pET21a(+)/HPV16 E6转化至E.coli BL21(DE3)中,通过异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达HPV16 E6-His标签融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后通过Western blot法鉴定;将纯化的HPV16型E6重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,ELISA检测免疫后血清多克隆抗体效价,并用Western blot法和免疫荧光技术分析HPV16 E6兔多克隆抗体的特异性.结果 成功构建pET21a(+)/HPV16 E6重组质粒,并经测序鉴定;在重组质粒pET21a(+)/HPV16 E6转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,经亲和层析法获得纯化的HPV16型E6重组蛋白,用于免疫日本大耳白兔获得多克隆抗体,抗体效价为1∶40 000,并用Western blot法和免疫荧光技术确认了多克隆抗体的特异性.结论 HPV16 E6原核表达成功并制备了HPV16 E6兔多克隆抗体.

关键词：人乳头瘤病毒(HPV)、E6蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：36

分类号：R392.11;R392-33;R373

资助基金：浙江省大学生科技创新活动计划新苗人才计划资助项目;温州市科技计划项目

在线出版日期：2020-07-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：264-270