TNF-α激活RhoA/ROCK信号通路增加单核细胞增生性李斯特菌感染内皮细胞的通透性

摘要：

目的 探讨大鼠肉瘤同源基因A/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进单核细胞增生性李斯特(Lm)感染致内皮细胞通透性升高的调控作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为未感染细胞对照组、TNF-α处理组(100 ng/mL TNF-α处理2h)、Lm感染组(以MOI=10的Lm感染2h,加入庆大霉素杀菌0.5h)、TNF-α处理的Lm感染组(Lm感染组细胞加入100 ng/mL TNF-α处理2h)、Y-27632联合TNF-α处理的Lm感染组(细胞用50 μmol/L ROCK抑制剂Y-27632处理30 min,再如上进行Lm感染和TNF-α刺激).Western blot法检测HUVEC的RhoA、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、ROCK蛋白水平,检测辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量分析HUVEC通透性变化,用异硫氰酸荧光素(FTTC)标记的鬼笔环肽染色检测纤维型肌动蛋白(F-actin)细胞骨架的改变.结果 TNF-α可降低Lm感染的内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达,促进其通透性升高、细胞骨架重排,并上调RhoA和ROCK的表达.ROCK抑制剂Y-27632可明显抑制TNF-α所致的HUVEC细胞骨架重排及通透性增高的作用.结论 TNF-α促进感染Lm的血管内皮细胞通透性增高可能通过RhoA/Rock信号通路调控.

关键词：人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、RhoA/ROCK、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞增生性李斯特(Lm)、通透性

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分类号：R392-33;R378.99+4

资助基金：中国科技部基础平台项目TDRC-2019-194-30

在线出版日期：2020-07-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：193-197