小鼠抗人Shisa样蛋白1(SSL1)多克隆抗体的制备和应用

摘要：

目的 制备抗 Shisa样蛋白 1(SSL1)的多克隆抗体,并探讨其在 SMMC-7721肝癌细胞中的定位.方法 通过反转录PCR从 HepG2肝癌细胞中克隆人 SSL1基因,将其插入到 pET-28a中构建 pET28a-SSL1原核表达载体,导入大肠杆菌 BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳吡喃糖苷(IPTG)诱导融合蛋白大量表达,通过 Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白;然后,利用纯化的蛋白免疫雌性昆明小白鼠,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光细胞化学染色法观察 SSL1在 SMMC-7721亚细胞中的表达,并用高尔基体荧光探针Golgi-Tracker Red对高尔基复合体进行标记以明确 SSL1在 SMMC-7721亚细胞中的定位.结果 成功扩增 SSL1基因,构建重组原核表达质粒 pET28a-SSL1,经诱导获得较高纯度的 SSL1蛋白,制备了抗 SSL1多克隆抗体.免疫荧光染色结果显示,SSL1主要在 SMMC-7721 细胞的细胞质中表达,Golgi-Tracker Red标记结果表明,SSL1 主要定位于SMMC-7721细胞的高尔基体上.结论 成功制备了有较高特异性的小鼠抗 SSL1多克隆抗体,并确定 SSL1定位于 SMMC-7721细胞的高尔基体.

关键词：Shisa样蛋白1(SSL1)、原核表达、多克隆抗体、亚细胞定位

所属期刊栏目：35

分类号：R392.1;Q291;Q344+.13

资助基金：国家自然科学基金;贵州省科学技术基金

在线出版日期：2020-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：843-848