间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建

摘要：

目的 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体3E1D7的重链补体决定区3(CDR3)随机突变抗体库.方法 用定向进化的方法在嵌合抗体3E1D7重链CDR3内部造成基因随机突变,将其通过双酶切克隆到哺乳动物细胞展示载体pSZI-CD中构建随机突变抗体库.抗体库基因转染CHO细胞,流式细胞术检测抗体基因是否在细胞表面表达.结果 3E1D7重链CDR3随机突变抗体库构建成功,库容量达到5.52×106.随机挑选20个阳性克隆进行测序鉴定,20个克隆均在不同位置发生碱基突变且没有重复突变,编码20种不同的氨基酸序列,抗体库具有较好的多样性和随机性.流式细胞术分析抗体基因库上膜情况,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达.结论 通过哺乳动物细胞表面展示技术,成功构建了库容量达到5.52×106的c-Met嵌合抗体重链CDR3随机突变抗体库.

关键词：间质上皮转化因子(c-Met)、哺乳动物细胞表面展示、流式细胞术

所属期刊栏目：35

分类号：R392.1;R979.1

资助基金：江苏省自然科学基金青年基金BK20150278;上海市科学技术委员会科研计划19431903200

在线出版日期：2019-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：557-562