miR-25-3p下调ADAM10表达阻断Notch信号通路抑制P19细胞向心肌细胞分化
目的 探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响.方法 采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平,Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平.通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平,Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平.生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用.感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10 d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Westernblot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平.结果 P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中,GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后,P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平.结论 miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关.
miR-25-3p、解整合素金属蛋白酶10 (ADAM10)、分化、心房利钠尿多肽(ANP)、Notch信号通路
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R392-33;R725.4;TQ925+.2
2017年度湖南省教育厅优秀青年项目17B233
2019-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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