外周血干细胞采集物来源的巨细胞病毒特异性T细胞的体外培养和扩增
目的 建立巨细胞病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CMV CTL) 体外扩增的方法.方法 用1μg/mL全长巨细胞病毒pp65 (CMV pp65) 多肽体外多轮刺激由粒细胞-集落刺激因子 (G-CSF) 动员的外周血干细胞采集物中分离的单个核细胞 (PBMC), 同时加入白细胞介素2 (IL-2) 、 IL-15、 IL-21扩增20 d.在培养第7天, 加入丝裂霉素处理的负载CMV pp65抗原肽的自体PBMC, 第10天补充经γ射线辐照处理并负载CMV pp65抗原肽的PBMC和CD3 (OKT3);对照组为未加入抗原肽进行扩增的PBMC组.采用多色流式细胞术分别对扩增前、扩增后的T淋巴细胞表型及细胞内肿瘤坏死因子α (TNF-α) 和γ干扰素 (IFN-γ) 的分泌水平进行分析, ELISA检测供者血清中CMV IgM/IgG抗体滴度水平.结果 培养后可以收集得到 (165.26±6.14) ×106个细胞, 其中CD3+ T细胞占89.21％, CD8+ T细胞占CD3+ T细胞的 (43.54±28.03) ％, CD4+ T细胞占CD3+ T细胞 (34.23±26.18) ％.获得的CD3+ T细胞以效应记忆性T细胞 (TEM) 为主, 且扩增培养后的CD8+和CD4+ TEM比例较培养前显著增高.另外, 培养后干细胞样记忆性T细胞 (TSCM) 和组织原位记忆T细胞 (TRM) 的比例均较培养前显著增加.在功能实验中, 培养后得到的IFN-γ+的分泌型CMV特异性CD8+ T细胞群比例较扩增前明显增加, TNF-α+ CMV特异性CD8+ T细胞比例呈增长趋势;能够分别分泌IFN-γ和TNF-α的CMV特异性CD4+ T细胞群比例与培养前无明显变化.此外, 供者体内CMV IgG水平与供者年龄呈现正相关, 且在该培养体系下, IFN-γ+和TNF-α+ CMV特异性T细胞扩增比例与供者年龄呈负相关.结论 本研究成功建立了在体外有效的培养和扩增CMV CTL的方法.
巨细胞病毒特异性T细胞、细胞因子、外周血干细胞采集物、体外扩增
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R392.12;R511
国家自然科学基金81470037;重庆市卫生计生委项目20142014
2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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