低氧处理增强体外培养小鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移能力

摘要：

目的 改良并建立小鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC) 原代培养方法, 探讨低氧条件对其增殖、迁移及凋亡的影响.方法 无菌条件下分离肺动脉, 胰蛋白酶酶解组织贴块法体外培养PASMC.倒置相差显微镜观察细胞形态、细胞计数法绘制细胞生长曲线;采用α平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 免疫荧光染色法鉴定细胞类型及纯度;运用CCK-8法检测不同氧含量对细胞增殖活力的影响, 在低氧条件下, 划痕实验检测细胞迁移能力, Western blot法检测细胞BAX蛋白水平.结果 培养的原代PASMC呈长梭形, 具有典型的"峰-谷"状, 9 d后细胞生长迅速呈单层致密排列, 细胞生长曲线近似"S"形;α-SMA阳性的细胞可达96％.与常氧组相比, 缺氧组在各时间点的PASMC增殖活性和迁移距离均明显增加, 在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力最强, 细胞BAX蛋白水平也明显降低, 且具有时间依赖性.结论 采用酶解组织贴块法可获取高纯度高活力的原代PASMC, 在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力强, 不易凋亡.

关键词：组织贴块法、低氧、肺动脉平滑肌细胞(PASMC)、增殖、迁移

所属期刊栏目：35

分类号：Q813.1+1;R392-33;R543.2(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金81470381,81770262;江苏省科技厅社会发展重点研发计划BE2015663;扬州大学研究生国际学术交流专项基金项目2018年度

在线出版日期：2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：39-45