成人真皮成纤维细胞原代培养及鉴定

摘要：

目的 探讨建立成人真皮成纤维细胞原代培养方法.方法 新鲜皮肤组织用分散酶Ⅱ(dispaseⅡ)消化,分离上皮和真皮层,分别采用组织块法和Ⅰ型胶原蛋白酶消化法分离真皮层成纤维细胞.用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 培养48 h,经胶原蛋白酶分离得到的成纤维细胞95％以上贴壁,同时细胞开始从组织块边缘贴壁延伸生长.培养5d时,组织块周围有大量细胞贴壁增殖.细胞生长迅速,第7天,增殖细胞层铺满培养皿.组织块法分离的成纤维细胞中可混杂少量上皮细胞团,而胶原蛋白酶消化法分离的细胞波形蛋白阳性率接近100％,几乎均为成纤维细胞.结论 胶原蛋白酶消化和组织块法均是快速、经济、有效获取真皮成纤维细胞的方法.胶原蛋白酶消化法可以更有效避免上皮细胞污染,分离的真皮成纤维细胞有较好的增殖能力.

关键词：真皮成纤维细胞、原代培养、细胞鉴定

所属期刊栏目：34

分类号：R392.12;Q813.1+1;Q25

资助基金：国家重点研发计划2016YFC0903800

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：824-828