兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)多克隆抗体的制备与应用

摘要：

目的 制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)的多克隆抗体并检测Tex33在小鼠精子发生过程中的表达情况.方法 以成年小鼠睾丸组织cDNA为模板,PCR扩增Tex33基因可读框序列,最终将PCR产物插入pET-30a载体,构建pET-30a-Tex33原核表达质粒.将原核表达质粒转化人大肠杆菌E.coli BL21中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Tex33蛋白.利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,免疫成年雄性新西兰大白兔,获得Tex33多克隆抗体.ELISA测定多克隆抗体效价,Western blot法及免疫荧光组织化学染色分析多克隆抗体效价及特异性.结果 成功构建了pET-30a-Tex33重组质粒,IPTG诱导下表达出Tex33重组蛋白.ELISA检测多克隆抗体滴度为1:1 000 000,Western blot法分析显示多克隆抗体能识别小鼠睾丸组织中的Tex33蛋白,免疫荧光组织化学染色显示Tex33在成年小鼠睾丸组织的精子细胞及精子均有表达,且定位于精子顶体及尾部.结论 成功制备出高特异性的兔抗小鼠Tex33多克隆抗体并发现Tex33在小鼠睾丸中表达.

关键词：小鼠、睾丸表达蛋白33(Tex33)、多克隆抗体、精子发生

所属期刊栏目：34

分类号：R392-33;Q954.43+4;Q786;R321.1

资助基金：国家自然科学基金31371174;江苏省自然科学基金BK20131230

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：643-649