靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用

摘要：

目的 制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用.方法 将scFv基因插入至pFuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响.结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关.结论 制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞.

关键词：c-Met、单链抗体(scFv)、A549细胞、靶向性、补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)

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分类号：R392-33;R734.2;Q511;Q279

资助基金：国家自然科学基金81472656;安徽省教育厅自然科学基金重点项目KJ2017A247;蚌埠医学院研究生科研创新项目Byycx1634

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：401-407