从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因方法的建立

摘要：

目的 建立从单个B细胞扩增天然配对的B细胞受体(BCR)重链和轻链基因的方法.方法 以用于亚洲人全基因组测序的“炎黄(YH)”细胞的永生化细胞系为材料,运用流式细胞术得到CD19+的单个B细胞,在单管里对单细胞进行裂解,获得总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增来源于同一个B细胞的天然配对的抗体重链和轻链,获得单个B细胞的全人源抗体的可变区序列信息.结果 建立了稳定的单细胞BCR扩增方法,抗体基因扩增成功率高达80％以上.运用此方法,流式细胞术分选的单个B细胞在-80℃冻存2周以内仍能成功扩增;同一管里扩增产物经TA克隆和Sanger测序验证,既包含同一个B细胞的抗体重链基因,也包含其轻链基因,即含有天然抗体配对信息.自主设计和整理了一套行之有效的单细胞BCR引物.结论 成功建立从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因的方法.

关键词：单细胞、B淋巴细胞、抗体、重链和轻链配对

所属期刊栏目：34

分类号：R392.12;Q2-3;Q81

资助基金：中央引导地方科技发展专项资金2016年度

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：367-372