FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化
目的 构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化.方法 从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上.重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJet转染到HEK293T细胞进行表达.使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白.然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色.结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化.结论 在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白.
FMS样的酪氨酸激酶3、突变体、蛋白纯化、FMS样的酪氨酸激酶3-内部串联重复
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R392.11;Q512
国家自然科学基金81470296,31701198;江苏省自然科学基金BK20170386;江苏省“科教强卫工程”青年医学人才项目QNRC2016719,QNRC2016771;江苏省卫生计生委医学科研课题面上项目H2017074;江苏省六大人才高峰2016-WSN-123;江苏省教育厅大学生实践创新训练项目201712688003Y;江苏省教育厅“青蓝工程”项目2016;苏州卫生职业技术学院重点项目szwzy201701
2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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