抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

摘要：

目的 制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测.方法 以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶mAb.用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,用间接ELISA检测mAb的免疫球蛋白(Ig)亚型与效价,用Western blot法和荧光偏振技术鉴定mAb的生物学特性,使用间接免疫荧光技术检测mAb与MDA-MB-231乳腺癌细胞中BLM、RecQ4和RecQ5的作用.使用免疫组织化学染色法分析该mAb与K562肿瘤细胞及其干细胞中RecQ解旋酶的结合.结果 获得能稳定分泌抗RecQ解旋酶mAb的杂交瘤细胞株6H5,染色体数目在94 ～ 104,抗体亚型为IgG1型,腹水效价为1×l0-7.该mAb能特异性结合大肠杆菌RecQ解旋酶,抑制其与DNA的结合,并能识别BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测K562肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达.结论 成功制备获得效价高、特异性强的抗RecQ解旋酶mAb.

关键词：RecQ解旋酶、单克隆抗体、制备、鉴定、应用

所属期刊栏目：34

分类号：R392.11;R392-33;Q813.2;S852.4+3

资助基金：国家自然科学基金81360349;贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目黔省专合字200657;贵州省国际科技合作计划黔科合外G字20117012

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：169-174