侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤
目的 观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制.方法 选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(miR-7 antagomir)组和miR-7拮抗剂对照(antagomir control)组,每组15只.造模后第2天通过侧脑室分别注射10 μL的生理盐水、miR-7 agomir、agomir control、miR-7 antagomir、antagomir control,造模后第7天进行神经功能评分,然后处死动物,取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变,干湿重法测定脑组织含水量,荧光实时定量PCR检测血肿周围脑组织中miR-7、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)表达,Western blot法分析血肿周围脑组织中GFAP、EGFR、信号转导子和转录激活子3 (STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平.生物信息学预测miR-7与EGFR的靶向结合情况,构建野生型荧光素酶报告基因载体及相应的突变载体,与miR-7模拟物(mimic)共转染REK293T细胞,检测荧光素酶活性.结果 与对照组相比,miR-7 agomir明显增加血肿周围脑组织miR-7水平,减轻脑组织病理损害,减少神经功能评分和脑组织含水量,并降低血肿周围脑组织GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值;miR-7 antagomir的作用则相反.相应阴性对照物对上述指标无影响.生物信息学分析发现EGFR的3'-非翻译区存在miR-7结合位点,而且miR-7 mimic明显降低野生型EGFR荧光素酶活性,但对突变型无影响.结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗星形胶质细胞活化,从而减轻大鼠脑出血后脑损伤.
微小RNA-7(miR-7)、表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑出血
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R722.15+1;R743.34(儿科学)
湖南省教育厅资助科研项目14C0906;怀化市科技计划资助项目2015F3102
2018-08-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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