中东呼吸综合征冠状病毒特异性纳米抗体噬菌体展示库的构建和鉴定

摘要：

目的 构建中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)特异性纳米抗体噬菌体展示库,并应用于纳米中和抗体筛选.方法 使用MERS-CoV的受体结合区(RBD)重组蛋白免疫羊驼后分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA.使用简并引物通过PCR扩增重链抗体的重链可变区(VHH)基因构建重组噬菌粒并转化TG1大肠杆菌克隆菌株,构建特异性纳米抗体噬菌体展示库,利用噬菌体展示技术进行纳米中和抗体筛选和功能鉴定.结果 构建的纳米抗体噬菌体展示库库容为1.31×108个,丰度为5.65×1010个/mL,VHH片段插入率达到96％,且具有较好的多样性,并利用构建的纳米抗体噬菌体展示文库成功筛选并表达出具有中和活性的纳米抗体.结论 成功构建了能有效应用于MERS-CoV中和纳米抗体筛选的噬菌体库.

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、纳米抗体、噬菌体展示库、中和

所属期刊栏目：33

分类号：R392;R714.253

资助基金：病原微生物生物安全国家重点实验室课题SKLPBS1704;创新课题3407049

在线出版日期：2018-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1662-1668