APOBEC3A-HBc融合蛋白的表达及活性鉴定
目的 构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性.方法 采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的PCR产物分别和含有全长HBc、四种C端截短体HBc的PCR扩增片段连接克隆入真核表达载体pcDNA3.0.将重组载体分别转染HEK293T细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测融合蛋白在HEK293T细胞中的定位,Western blot法检测融合蛋白的表达水平;尿素变性PAGE法分析融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性.结果 构建的五种融合蛋白表达载体,可在HEK293T细胞中表达五种融合蛋白,4种含HBc截短体编码的融合蛋白表达载体比含全长HBc编码的融合蛋白载体的表达能力强;含全长HBc的融合蛋白APOBEC3A-HBc主要定位于细胞质,而含HBc截短体的融合蛋白APOBEC3A-HBc144S、APOBEC3A-HBc144E、APOBEC3A-HBc144AAA和APOBEC3A-HBc144A均主要定位于细胞核中;HBc截短体融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性高于全长HBc融合蛋白.结论 成功构建APOBEC3A与不同长度和序列HBc的融合蛋白真核表达载体,APOBEC3A与全长HBc及截短体HBc的融合蛋白在表达能力、细胞内定位以及胞嘧啶脱氨基活性具有明显差异.
乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)、载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)、脱氨基活性
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Q513+.5;R512.6+2;Q344+.13(蛋白质)
国家自然科学基金31570168
2018-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1521-1528
