敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因促进K562/ADM细胞凋亡
目的 研究短发夹RNA(shRNA)敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/ADM细胞凋亡的影响.方法 设计并合成3对针对人Alox5基因的靶向shRNA片段,插入到pGenesil-1干扰载体中,经过酶切和测序验证,成功构建pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒,转染K562/ADM细胞,实时定量PCR和Western blot法检测Alox5 mRNA及蛋白水平,筛选最好干扰组.选择较高干扰效率的pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组作为实验组,采用实时定量PCR检测K562/ADM细胞bcr/abl mRNA水平、Westem blot法检测BCR/ABL融合蛋白水平、流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 酶切及测序结果显示重组质粒构建成功.与阴性对照组(pGenesil-1-K562/ADM)和空白K562/ADM细胞组相比,转染pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组的K562/ADM细胞Alox5 mRNA和蛋白水平均明显降低.敲低K562/ADM细胞Alox5后,bcr/abl mRNA、BCR/ABL融合蛋白水平均显著降低、细胞凋亡率显著增加.结论 敲低Alox5基因后,K562/ADM细胞bcr/abl mRNA和BCR/ABL融合蛋白表达水平下降,细胞凋亡率增加.
慢性粒细胞白血病(CML)、bcr/abl、花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)、K562/ADM细胞
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R392-33;R733.7;Q279
2018-01-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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