响应面优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞的工艺
目的 优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率.方法 采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿瘤坏死因子α(rmTNF-α)和诱导时间为考察因素,未成熟树突状细胞(imDC)和成熟树突状细胞(mDC)获得量为考察指标,采用Box-Behnken设计试验,响应面法分析并验证试验结果,并结合光学显微镜、电子显微镜、流式细胞术分析BMDC形态、表面标志物等指标.结果 响应面优化诱导imDC最佳诱导工艺rmGM-CSF为46 ng/mL、rmIL-4为24ng/mL,诱导时间为6 d;imDC获取量为(4.58±0.28)×106个,相对偏差为4.00％.诱导mDC最佳工艺LPS为1.4 μg/mL、rmTNF-α为30ng/mL,诱导时间为1 d;mDC获取量为(4.21 ±0.15) ×106个,相对偏差为3.80％.体外诱导5～7 d,可获得足量的具有典型树突状的DC,流式细胞术检测发现imDC较高表达CD11c(68.62％ ±2.3％),低表达CD86 (37.95％±1.8％);mDC高表达CD11c(82.05％±1.6％)和CD86(90.34％±1.4％).结论 单因素实验与响应面优化联合优化多细胞因子体外快速、高效诱导扩增DC,为进一步研究提供了工具.
未成熟树突状细胞、成熟树突状细胞、Box-Behnken设计、响应面法
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Q291;R392.12
国家自然科学基金31072236;福建省中青年教师教育科研项目JAT160409;福建省大学生创新创业计划项目201610399044
2017-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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