贝纳柯克斯体重组抗原Com1和急性Q热抗原A(adaA)的纯化和鉴定

摘要：

目的 原核表达并纯化2种贝纳柯克斯体(C.burnetii)抗原主要外膜蛋白质Com1和急性Q热抗原A(adaA),并对重组Com1和adaA进行质谱鉴定以及抗原性鉴定.方法 全基因合成编码Com1和adaA的基因序列,并将其分别构建到原核表达载体pET-20b(+),将构建好的载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Com1和adaA.通过镍亲和柱层析纯化重组Com1和adaA,切取纯化的蛋白质条带进行质谱鉴定.将纯化的重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清进行Western blot分析,检测其免疫反应特性.结果 构建了原核表达载体pET-20b(+)-Com1以及pET-20b(+)-adaA,重组抗原Com1和adaA均以可溶形式得到了高效地表达和纯化,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量(Mr)分别为27 000与25 000,质谱鉴定结果确证其为C.burnetii的抗原蛋白Com1和adaA.重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清均有阳性反应条带,条带Mr大小与SDS-PAGE结果一致.结论 成功高效表达了可溶重组Com1和adaA并证实其免疫反应特异性.

关键词：贝纳柯克斯体(C.burnetii)、重组抗原Com1和adaA、质谱鉴定、抗原性鉴定

所属期刊栏目：33

分类号：R392.11;R392-33;Q939.93

资助基金：国家自然科学基金31570926,81601732;江苏省医学重点人才课题ZDRCA2016031

在线出版日期：2017-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：726-730