敲低鞘氨醇激酶1增强人结肠癌RKO细胞对顺铂的敏感性

摘要：

目的 探讨沉默结肠癌RK0细胞鞘氨醇激酶1(SphK1)基因对顺铂(DDP)敏感性的影响及作用机制.方法 构建靶向SphK1基因的慢病毒载体并感染RKO细胞后,实时定量PCR检测SphK1的mRNA水平,Western blot法检测SphK1蛋白水平.然后将RKO细胞分为SphK1低表达组(shSphK1组)、阴性感染对照组(shControl组)和空白对照组.培养24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖活性;(0、2、4、8、16、32) μg/mL DDP处理细胞后,MTT法再次检测细胞增殖活性,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot法检测KI-67抗原(ki67)、Bcl-2、胱天蛋白酶9(caspase-9)和caspase-3蛋白的水平.结果 敲低SphK1基因能抑制RKO细胞的增殖,促进细胞凋亡.DDP呈时间和浓度依赖性抑制各组细胞的增殖,与对照组和shControl组相比,敲低SphK1的细胞增殖能力显著降低;DDP呈剂量依赖性诱导细胞凋亡,且敲低SphK1的细胞凋亡率明显高于对照组和shControl组.此外,敲低SphK1后,抑制ki67和Bcl-2的表达,增加caspase-9和caspase-3的表达,经DDP处理后,ki67和Bcl-2蛋白的表达水平明显下降,caspase-9和caspase-3蛋白的表达水平显著增加.结论 敲低SphK1基因降低Bcl-2水平、增加caspase-9、caspase-3水平,抑制RKO结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并增强RKO细胞对DDP的敏感性.

关键词：鞘氨醇激酶1(SphK1)、顺铂(DDP)、RKO结肠癌细胞、细胞增殖、细胞凋亡、化疗敏感性

所属期刊栏目：33

分类号：R735.3;R965;Q279;Q255;R392-33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81460380;广西省自然科学基金2011GXNSFA018182

在线出版日期：2017-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：623-629