自噬调控脂多糖诱导的巨噬细胞炎症因子水平
目的 探讨细胞自噬调控对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞引发炎症反应的影响及其分子机制.方法 分离小鼠骨髓间充质干细胞,经过诱导分化获得骨髓来源的巨噬细胞,通过LPS刺激巨噬细胞建立炎症反应细胞模型.利用绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)质粒转染观察自噬体的形成;利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)和雷帕霉素(Rap)分别抑制和促进细胞自噬,研究自噬干预对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响;实时定量PCR检测LC3B、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、IL-6和IL-12p40的mRNA水平,Western blot法检测LC3B、核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白水平.结果 LPS刺激巨噬细胞2、4、6h,诱导巨噬细胞LC3B mRNA和蛋白高表达,巨噬细胞中自噬体增加.与单独LPS刺激相比,3-MA可抑制细胞自噬,显著增加炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p40 mRNA表达,而Rap处理减少自噬数量,降低TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p40 mRNA水平;自噬抑制后,可通过降低IκBα和增加p-NF-kBp65的表达而影响NF-κB信号通路,进而调节炎症细胞因子表达.结论 自噬可调控LPS刺激巨噬细胞引起的炎症反应.
细胞自噬、脂多糖、炎症反应、巨噬细胞
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R392.12;R392-33;R364.5
国家十二五科技重大专项2012ZX10002004-006,2012ZX10004904-003-001,2013ZX10002002-006-001;国家自然科学基金81270532;北京市自然科学基金7162085;首都特色临床应用研究Z121107001012167;北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划2013-3-075;北京市属医学科研院所公益发展改革试点项目京医研2016-2
2017-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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