成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养

摘要：

目的 探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法.方法 采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞.波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后细胞SMAD家族成员2/3(Smad2/3)蛋白及磷酸化水平.结果 差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似“S”形.波形蛋白阳性率可达95％.CCK-8法显示在第3～5天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加.结论 建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法.

关键词：成年小鼠、心脏成纤维细胞、原代培养、细胞鉴定

所属期刊栏目：33

分类号：Q813.1+1;R392-33;Q253(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金81270197

在线出版日期：2017-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：67-71