Na+-K+-ATP酶α1亚基DR多肽单克隆抗体的制备和应用
目的 制备钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)α1亚基DR区段(s97 DVEDSYGQQWTYEQR911)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其活性.方法 以合成的DR-钥孔戚血蓝素(KLH)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗DR的杂交瘤细胞株,制备Na+-K+-ATPase α1亚基DR mAb.ELISA测定杂交瘤细胞上清中mAb效价,斑点免疫杂交、Western blot法及免疫荧光细胞化学染色法检测单克隆的特异性,采用SensoLyte@FDP蛋白磷酸酶定量试剂盒检测Na+-K+-ATPase活性,高糖细胞损伤实验检测DR mAb对高糖引起细胞损伤的保护作用.结果 成功制备3株稳定分泌抗体的阳性细胞株.选择强阳性DRm217细胞株,制备腹水进一步验证.免疫荧光细胞化学染色、免疫斑点杂交及Western blot法结果显示,DRm217 mAb能够特异性结合在细胞膜表面,识别Na+-K+-ATPase的DR多肽.DRm217能够提高Na+-K+-ATPase活性,对高糖引起的细胞损伤具有一定的保护作用.结论 成功制备了针对Na+-K+-ATPase DR多肽的mAb.
钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)、DR多肽、单克隆抗体
32
Q813.2;R392-33;R446.61(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金81400232;中国博士后基金2015M572571;中央高校基本科研业务费-国际合作资助项目xjtu-2015gjhz17
2017-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1695-1699
