抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测

摘要：

目的 用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测.方法 设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1 D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性.结果 感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带.且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性.结论 成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体.

关键词：c-Met、嵌合抗体、单价抗体、慢病毒表达

所属期刊栏目：32

分类号：R392.11;Q876;R446.61

资助基金：国家科技部“重大新药创制”科技重大专项2014ZX09102-043-003;国家自然科学基金81371403,81501102;上海市科委基础研究领域项目13JC1401102;苏州市科技计划项目ZXY2012029

在线出版日期：2017-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1544-1548,1553