表面展示有前列腺酸性磷酸酶多肽(PAP114-128)的PP7噬菌体样颗粒的制备及其活性验证
目的 获得表面展示有前列腺酸性磷酸酶多肽片段(PAP114-128)的PP7噬菌体样颗粒,并证实其保留原有的生物活性.方法 用基因突变和重叠PCR技术扩增出PP7衣壳蛋白单链二聚体(简称为2PP7)基因,将其插入到载体pETDuet-1中,获得质粒pETDuet-2PP7,然后通过普通PCR获得携带有PAP114-128编码基因的PP7衣壳蛋白基因,将其插入到质粒pETDuet-2PP7中,获得质粒pETDuet-2PP7-PAP114-128;将上述重组质粒转化大肠杆菌,诱导表达产物用SDS-PAGE、双向免疫扩散以及ELISA进行鉴定.结果 以Ex Taq DNA聚合酶行重叠PCR可获得2PP7基因,其表达产物衣壳蛋白单链二聚体与野生型PP7噬菌体衣壳蛋白的抗原性相同;展示于PP7噬菌体样颗粒表面的PAP114-128表位与天然的人PAP蛋白相应表位无异,且能诱导较高水平的抗体产生.结论 含重复序列的2PP7基因可通过将基因突变和重叠PCR技术联用获得,且以其为基础成功制备表面展示有PAP114-128的PP7噬菌体样颗粒,不仅可解决多肽不稳定的问题,也为研究多肽的递送及功能奠定基础.
PP7噬菌体、前列腺酸性磷酸酶、衣壳蛋白单链二聚体、多肽
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R392.11;R446.61;Q939.48
山东省自然科学基金ZR2015HL036;山东省高等学校科技计划J14LK14;潍坊医学院2013年科技创新重点基金K1301004
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1356-1361
