蛋白激酶A抑制剂H-89通过调节核糖体蛋白S6激酶1的磷酸化阻断SP600125诱导的CMK细胞多倍体化
目的 研究核糖体蛋白S6激酶1 (S6K1)翻译后修饰在巨核细胞倍体化调控方面的作用.方法 c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89单独或联合处理CMK原始巨核细胞白血病细胞.碘化丙啶(PI)染色,结合流式细胞术检测DNA的相对量,从而进行DNA倍体分析;Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)下游靶分子S6K1表达和磷酸化修饰(Thr389和Thr421/Ser424)的变化.使用分子对接和激酶活性检测分析H-89与S6K1结合的关系以及对激酶活性的影响.结果 SP600125以时间和剂量依赖的方式诱导CMK细胞多倍体化,同时,上调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和下调Thr389的磷酸化.H-89不但部分阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化,而且下调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和上调Thr389磷酸化.分子对接和激酶活性分析发现H-89通过占据ATP结合位点,抑制S6K1活性.值得注意的是,H-89和SP600125均抑制PKA的活性,而且两者联合进一步抑制了PKA的活性,表明H-89阻断SP600125诱导CMK多倍体化与其对PKA的作用无关,而与S6K1磷酸化修饰状态的改变有关.结论 H-89通过调节S6K1磷酸化阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化.
核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、巨核细胞、多倍体化
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Q279;R329-33(细胞生物物理学)
国家自然科学基金61302003,31571398
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1321-1326
