锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合
目的 观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响.方法 在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0、24、48、72、96)h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)分别用相应Alexa Fluor((R)) 350抗沙门菌抗体(蓝色荧光)和Cy5抗LAMP1抗体(红色荧光)标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况.结果 用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少.结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合.
锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)、细胞增殖、吞噬体、溶酶体
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R378.91;R392.12;Q253(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
重庆市自然科学基金cstc2012A10023;重庆市教委科研基金KJ1500203
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1317-1320,1326
