犬转铁蛋白受体基因的沉默及稳定感染细胞系的建立

摘要：

目的 通过构建沉默犬转铁蛋白受体(TfR)基因慢病毒载体并感染Walter Reed犬(WRD)细胞,建立稳定感染沉默犬TfR基因的细胞系.方法 构建2条针对犬TfR基因的特异性短发夹RNA(shRNA),用慢病毒载体转染HEK293T细胞,包装、收集病毒并测定其滴度.用包装好的慢病毒感染WRD细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot法检测TfR的mRNA和蛋白的表达水平以评价干扰效率,筛选沉默效果较好的靶点,并建立稳定沉默TfR基因的WRD/TfR-细胞系.结果 成功构建出TfR小于涉RNA慢病毒载体,成功包装2种不同靶点的沉默TfR基因的RNA干扰慢病毒,测定其病毒滴度均达到1×108转导单位(TU)/mL.选用沉默效果较好的pGMLV-TfR A2载体,建立TfR小干涉RNA慢病毒载体稳定感染的WRD/TfR-细胞系.结论 成功构建TfR小于涉RNA慢病毒载体并建立了稳定感染WRD/TfR-细胞系.

关键词：TfR、RNA干扰、慢病毒载体、WRD细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金8126024

在线出版日期：2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1227-1230