重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选

摘要：

目的 应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(scFv)库,并从抗体库中进行筛选.方法 利用重组人IL-4R(rhIL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增VH和VL基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的scFv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切scFv和pCANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析.结果 经过3轮筛选,构建了库容为2×108的rhIL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rhIL-4R蛋白scFv基因全长741 bp,编码247个氨基酸.通过VBASE2数据库分析,抗rhIL-4R蛋白的VH和VL基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区.结论 成功构建了抗rhIL-4R蛋白噬菌体scFv库.

关键词：重组人白细胞介素4(rhIL-4R)、噬菌体展示技术、单链抗体

所属期刊栏目：32

分类号：R392.11;Q789;Q939.48

资助基金：2011年贵州省社会发展科技攻关项目[黔科合SY字20113020];贵州省委组织部高层次人才科研条件特助经费TZJF-2011年28号;2014年度贵阳中医学院“2011协同创新中心”联合资助

在线出版日期：2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：829-833