硒蛋白PP1(SEPP1)过表达抑制786-0和769-P人肾癌细胞增殖并引起G2/M期阻滞
目的 构建硒蛋白PP1(SEPP1)基因的慢病毒质粒并研究SEPP1对人肾透明细胞癌细胞增殖的影响.方法 以HEK293T细胞的cDNA为模板,通过PCR法获得人SEPP1全长序列片段,并与慢病毒表达载体pLV-EGFP (2A) Puro质粒相连接,获得重组pLV-EGFP(2A) Puro-SEPP1载体并进行基因测序验证.将重组慢病毒载体与包装质粒共同转染HEK293T细胞,进行病毒包装.用病毒上清感染786-O和769-P细胞,采用Western blot法检测SEPP1蛋白表达.按照重组慢病毒感染细胞、空载体感染细胞、未感染细胞进行分组,通过MTS法检测细胞增殖活性、细胞平板克隆形成实验检测克隆形成能力、流式细胞术检测细胞周期.结果 酶切后凝胶电泳得到与SEPP1的DNA大小相一致的片段与空载体片段,基因测序的结果与SEPP1序列完全一致.经pLV-EGFP (2A) Puro-SEPP1感染的786-O、769-P细胞在感染48h后,荧光显微镜下可见EGFP明显表达,实验组与空载体组、空白对照组相比较,SEPP1蛋白表达水平均明显提高.pLV-EGFP(2A) Puro-SEPP1感染组的细胞增殖能力降低,SEPP1过表达细胞集落形成能力明显降低,SEPP1过表达引起肾癌细胞G2/M期阻滞.结论 在786-O和769-P细胞过表达SEPP1显著降低细胞增殖能力,并在786-O细胞中引起G2/M期阻滞.
硒蛋白PP1(SEPP1)、重组慢病毒载体、肾透明细胞癌、肿瘤增殖
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R737.11;R392-33;Q253;R34(肿瘤学)
国家高技术研究发展计划8632014AA020607
2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
764-769
