羊布鲁杆菌外膜蛋白19(OMP19)的表达及鉴定
目的 构建可表达羊布鲁杆菌外膜蛋白19 (OMP19)的真核表达载体,研究OMP19对宿主细胞凋亡的作用.方法 以羊布鲁杆菌M5-90疫苗株基因组为模板,PCR扩增脂化型外膜蛋白19(L-OMP19)与非脂化型外膜蛋白19 (U-OMP19)基因,产物连接至pZeroBack/blunt载体;经双酶切鉴定、测序正确的基因亚克隆到用于包装慢病毒的表达载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green上,双酶切鉴定,构建含正确L-OMP19、U-OMP19基因的真核表达载体pHAGE-L-OMP19与pHAGE-U-OMP19.分别将构建好的载体转染293FT细胞、Huh7.5.1细胞和JEG-3细胞,用Western blot法及免疫荧光技术检测L-OMP19、U-OMP19蛋白的表达,用藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexin V-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 构建能在细胞内表达L-OMP19和U-OMP19基因的真核表达载体pHAGE-L-OMP19和pHAGE-U-OMP19,二者转染细胞后表达的L-OMP19和U-OMP19蛋白可与特异性抗体反应;L-OMP19和U-OMP19不引起Huh7.5.1细胞凋亡,但可引起JEG-3细胞的大量坏死.结论 成功构建可用于慢病毒包装的L-OMP19和U-OMP19真核表达载体,胞内重组表达的脂蛋白OMP19具有良好的抗原性,为研究布鲁杆菌脂蛋白在宿主细胞内作用机制提供实验材料.
布鲁杆菌、布鲁杆菌病、脂蛋白OMP19、真核表达、细胞凋亡
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S852.61;R516.7;R392.12(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金31372443;广东省科技计划2014A020214003;大学生创新创业训练项目201412121109
2016-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
470-473,478
