犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用

摘要：

目的 构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定.方法 应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段.经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性.结果 通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体pET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1:6400000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性.结论 成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体.

关键词：犬博卡病毒(CBV)、结构基因VP2、多克隆抗体

所属期刊栏目：32

分类号：R392.11;R392-33;S852.65

资助基金：国家自然科学基金81260247;宁夏高等学校科学技术研究项目2002260503

在线出版日期：2016-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：253-257