悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达
目的 将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性.方法 将贴壁状态的CH0-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞.根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆人真核表达载体pcDNA3.1中,所得载体命名为pcDNA3.1-HC和pcDNA3.1-LC.将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用FreeStyle MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性.结果 成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞.结论 成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具.
细胞驯化、CHO细胞、抗体表达、真核表达、转染
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R392-33;Q786;R392.11
国家重点基础研究发展计划973计划2013CB530500;国家自然科学基金81172146
2016-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1-4,9
